RP-HPLC 测定血药浓度

　　2.4 血样预处理

　　冰箱中取出血清,室温解冻,吸取血清200 μl,置5 ml的离心管中,加入CNZ贮备液 10 μl、乙酸乙酯1 ml,涡旋混合60 s,3 500 r/min离心10 min,吸取乙酸乙酯,于40℃用氮气吹干,加入甲醇溶液100 μl溶解,精密吸取取20 μl进样。

　　2.5 线性关系考察

　　2.5.1 标准血样精密量取“2.2”项下贮备液适量,用甲醇溶液稀释,加入适量空白人血清,制成含LTG l.0～50.0 μg/ml、PBT 1.0～150.0 μg/ml的系列浓度标准血样。

　　2.5.2 线性试验取“2.5.1”项下含LTG分别为1.00、2.00、5.00、10.00、20.00、50.00 μg/ml,含PBT分别为1.0、2.0、5.0、10.0、50.0、150.0 μg/ml的标准血样,按“2.4”项下方法处理,进样测定,分别以样品与内标的峰面积比Y对浓度C线性回归,得LTG标准曲线为:Y=0.173 9C-0.022 1(r=0.999 1);PBT标准曲线为Y=0.210 5C 0.033 7(r=0.999 0)。表明血清中LTG在1.00～50.00 μg/ml和PBT在1.0～150.0 μg/ml的浓度范围内线性关系良好。

　　2.6 回收率和精密度实验

　　取人空白血清200 μl,分别加入LTG和PBT对照品工作液,配成浓度为2.00、20.00和40.00 μg/ml和浓度为5.0、20.0和50.0 μg/ml的标准血清。按“2.4”项下方法操作,分别测得两药物的回收率及日内、间精密度,结果见表1。LTG及PBT的平均回收率均>97.0%,日内精密度<4.3%,日间精密度<5.4%。

　　2.7 干扰实验

　　在此色谱条件下,苯妥英钠和卡马西平的保留时间分别为15.1 min和21.3 min,对两种药物峰及内标峰均无干扰。用本法监测的56例样品中,亦未见有其他峰干扰。

　　2.8 人体血样测定

　　本法用于数例患者服药达稳态后(门诊患者两药均服用1个月后),血清中药物谷浓度(清晨抽取服药前患者空腹血)的测定。