RP-HPLC 测定血药浓度

　　拉莫三嗪(1amotrigine,LTG)为一种新型的广谱抗癫痫药,对部分性发作、GTCS、Lennox-Gastaut综合征、失神发作和肌阵挛发作有效,临床上用于难治性癫痫的辅助治疗。由于其半衰期较长(24～30 h),可以每日1次给药。苯巴比妥(phenobarbital,PBT)常作为小儿癫痫的首选药物,广谱,起效快,对GTCS疗效好,也用于单纯及复杂部分性发作,对发热惊厥有预防作用,半衰期长达37～399 h。上述药物的治疗范围窄,且抗癫痫效果、药物不良反应与药动学特征有关。为了评价疗效或确定给药方案,使给药方案个体化,以提高药物治疗水平,达到临床安全、有效、合理的用药。因此开展治疗药物监测有重要临床意义。本研究在文献的基础上进行改进,采用以氯硝西泮(Clonazepam,CNZ)为内标,建立了HPLC法同时测定两者的浓度,为临床合理用药提供依据。

　　1 仪器与试药

　　1.1 仪器

　　Agilent高效液相色谱分析仪(美国Agilent公司);低温高速离心机(德国Beckman公司);KQ50B型超声波清洗器(江苏昆山市超声仪器有限公司);XW-80A漩涡混和器(上海医科大学仪器厂);电子分析天平(AG285型,瑞士梅特勒-托利多公司)。

　　1.2 试药

　　LTG对照品(批号:051130,葛兰素史克制药有限公司,纯度:99.5%);苯巴比妥对照品(批号:171222-200504,中国药品生物制品检定所);内标氯硝西泮(批号:150230-200201,中国药品生物制品检定所);乙腈、甲醇、二氯甲烷均为进口色谱纯(美国Tedia公司);磷酸钾缓冲液(PBS,北京中杉金桥生物技术有限公司,分析纯);异丙醇(国药集团化学试剂有限公司,分析纯);水为去离子水。

　　2 方法与结果

　　2.1 色谱条件

　　色谱柱:Agilent Zorbax XDB-Cl8柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;流动相:0.1%乙酸-乙腈;梯度程序为:0.00→7.00 min,A∶B=90∶10;7.00→12.00 min,A∶B=70∶30;12.00→14.00 min,A∶B=90∶10。流速:1.0 ml/min;检测波长:240 nm;柱温:40℃;内标:氯硝西泮;结果表明,LTG、PBT和CNZ的保留时间分别约为6.2、10.8和12.7 min,各成分峰形良好,分离完全。

　　2.2 对照品溶液和内标贮备液的制备

　　精密称取LTG、PBT和 CNZ 10.0、10.0和5.00 mg,分别置于25 ml量瓶中,加甲醇溶液溶解并定容配制成400.0,400.0和200.0 μg/ml的贮备液。

　　2.3 样本采集

　　清晨患者服药前抽取静脉血2 ml,室温3 500 r/min离心8 min,分离并留取血清,置-20℃冰箱保存,待测。