禽流感快速高通量检测新技术是基于分子生物学的方法,在病毒感染的初期即可快速确诊病毒的存在。该方法包括两大主要步骤。第一步,联合使用赛默飞世尔公司的KingFisher自动化磁珠提取纯化仪器,及Invitrogen公司的Ambion病毒RNA提取试剂盒,进行自动化的病毒RNA提取,该步骤需时约30分钟。第二步,实时定量RT-PCR检测病毒RNA,该步骤需时约3小时。整体方法经过优化,并经过超过200,000禽类咽喉拭子样品的检测验证。
这项技术可以用于从生物体液和无细胞样品中,如血清、血浆、口腔拭子和细胞培养液中,提取病毒RNA。从无细胞样品中分离纯化RNA比从组织和培养细胞中分离纯化RNA更具挑战性。这是因为低的病毒滴度、大的操作体积和样品的复杂性,且操作步骤必须适合实时定量RT-PCR。使用自动化磁珠提取方法可满足上述各项要求,赛默飞世尔公司的KingFisher专利磁珠提取技术,不需有机溶剂或RNA沉淀步骤,消除了基于滤膜的方法经常碰到的问题,如滤膜堵塞、大的洗脱体积和不稳定的产率。而结合后续的实时定量RT-PCR,可以检测到低至10拷贝的病毒RNA,极大提高了禽流感病毒检测的灵敏度。
这项技术可以用于从生物体液和无细胞样品中,如血清、血浆、口腔拭子和细胞培养液中,提取病毒RNA。从无细胞样品中分离纯化RNA比从组织和培养细胞中分离纯化RNA更具挑战性。这是因为低的病毒滴度、大的操作体积和样品的复杂性,且操作步骤必须适合实时定量RT-PCR。使用自动化磁珠提取方法可满足上述各项要求,赛默飞世尔公司的KingFisher专利磁珠提取技术,不需有机溶剂或RNA沉淀步骤,消除了基于滤膜的方法经常碰到的问题,如滤膜堵塞、大的洗脱体积和不稳定的产率。而结合后续的实时定量RT-PCR,可以检测到低至10拷贝的病毒RNA,极大提高了禽流感病毒检测的灵敏度。
(实习编辑:肖晓堃)


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