胆红素和尿素氮临床检验

　　胆 红 素

　　问： 目前国内胆红素在临床检验中主要存在哪些问题?

　　答： 主要有三个方面的问题：

　　临床检验结果之间的可比性较差：同样一个检测样品，各厂家生产的试剂盒其检验结果往往相差很大，但并不能因此判断出试剂盒的好坏。

　　正常水平的胆红素含量比较低，使得检测方法的灵敏度和检测仪器的精密度成为影响检测结果的重要因素之一。

　　氧化法测定胆红素过程中对pH值的要求很严格，外来影响导致pH值的变化对检测结果产生很大的影响。

　　问： 为什么临床检验结果之间的可比性较差?

　　答： 主要存在两方面的问题：

　　标准品问题：胆红素本身不稳定，不易保存，特别是直接胆红素制备困难;由于国内目前没有统一的标准品供应，造成胆红素标准品的标准化问题得不到解决;目前市场上销售的胆红素标准品多为各种胆红素的混合物(或异构体)，不适于作为直接胆红素测定的标准物。

　　直接胆红素测定方法学上的概念模糊：一方面，近来胆红素测定的方法主要有两类，即重氮法和氧化法。据文献报道，重氮法检测了结合胆红素(Bc)和大部分的δ胆红素，Bc又包括mBc和dBc，而氧化法检测了结合胆红素(Bc)，是否包括δ胆红素还是个未知数，尚无相关数据;另一方面，直接胆红素和结合胆红素的概念模糊，导致有人认为直接胆红素就是结合胆红素，也有人认为酶氧化法测定的结果是结合胆红素，而化学氧化法测定的结果是直接胆红素。由于上述的概念模糊，造成临床上对检测结果的解释发生问题。

　　问： 上面讲到了多种胆红素，但胆红素具体是怎样分类的还不是很清楚，能不能做一个简单的介绍?

　　答： 根据最近修正的胆红素定义，总胆红素应包括游离胆红素(Bu)、结合胆红素(Bc)及δ胆红素(Bδ)，其中结合胆红素(Bc)又分为mBc和dBc。在重氮反应中，直接胆红素包括结合胆红素Bc(mBc及dBc)和δ胆红素(Bδ)，文献报道只有85%左右的Bδ与重氮试剂发生直接反应。

　　问： 在氧化法检测胆红素的过程中，如何减少pH值的影响?

　　答： 加倍注意仪器的清洗，一定要清洗干净对于某些仪器，胆红素的检测要避开强酸、强碱试剂项目，以防污染。

　　问： 如何解释同一标本，直接胆红素的重氮法检测结果通常会高于氧化法的检测结果?

　　答： 因为重氮法检测了结合胆红素(Bc)和大部分的δ胆红素(Bδ)，而酶氧化法等只检测了结合胆红素(Bc)。

　　尿 素 氮

　　问： 目前尿素氮在临床检验中主要存在哪些问题?

　　答： 主要有四个方面的问题： 试剂稳定性较差。试剂中酶量不足，特别是NADH的不足。存在方法学上的缺陷。一些抗凝剂的不当使用也会导致检测结果的偏差。

　　问： 尿素氮试剂的稳定性为什么较差，针对这个问题如何解决?

　　答： 尿素氮试剂的稳定性差是由于试剂中NADH的不稳定造成的。NADH容易被氧化，造成吸光度下降，并且目前尚无好的方法能够使尿素氮试剂中的NADH保持稳定。这个问题可以用标准加以控制，在检测的过程中经常定标。

　　问： 为什么在临床检验中尿素氮试剂的线性不好，造成BUN高值检测不出?

　　答： 同上面的问题一样，原因都出在NADH的稳定性上。NADH被氧化后含量降低无法完成同BUN的偶联反应。

　　问： 针对NADH含量低的问题，如何解决?

　　答： 根据相关报道，有人建议在试剂中加入正常用量6倍的NADH。

　　问： BUN检测方法学上存在什么缺陷?

　　答： 目前尿素氮的检测方法主要是脲酶-NADH偶联法，该方法学存在以下2个缺陷：其一，血清中的血氨含量增高的情况下，会同时消耗GLDH和NADH，使得检测结果不准确;其二，内源性的酶与指示酶GLDH竞争氧化NADH，从而降低了酶促偶联系统的准确性。

　　问： 尿素氮检验方法学上的缺陷如何弥补?

　　答： 目前尚无好的解决方法，但可以根据临床诊断结果来纠正参数，例如延长延迟时间等。

　　问： 什么样的抗凝剂会造成检测偏差?

　　答： 带氨的抗凝剂会消耗GLDH和NADH，造成检测结果的正偏差;而含有抑制脲酶活性成分的抗凝剂会造成检测结果的负偏差。

（实习编辑：陈战锋）