HBsAg弱阳性样本的三种测定方法比较

　　乙型肝炎病毒(HBV)感染是一个十分敏感的问题，其感染者在不少行业、岗位受到限制。因此，乙肝表面抗原(HBsAg)检测的准确性对不少受检者来说至关重要，同时也对乙型肝炎的早诊断、早治疗具有十分重要的意义 。然而，日常工作中部分HBsAg滴度表达很低的标本由于试剂的敏感性、特异性等指标的差异，导致不同方法测定结果有所差异，造成一定程度的误诊和漏诊,甚至引发医患矛盾或医疗纠纷。作者用目前国内常用的三种检测方法对收集的HBsAg弱阳性标本进行测定，并对结果进行分析比较，现报告如下。

　　材料与方法

　　1.1 标本来源 选取2006年7月～2007年5月我院门诊及住院患者静脉血清标本117份，所有标本经GICA检测为弱阳性(报告结果为阳性)或可疑弱阳性(报告结果为阴性)，及时分离血清于-200C冰箱保存，标本无黄疸、脂血、溶血现象。

　　1.2 试剂和仪器 (1)试剂：GICA试纸条为艾康生物技术(杭州)有限公司提供，ELISA试剂盒由上海荣盛生物技术有限公司提供，化学发光定量检测试剂为雅培公司提供的配套试剂。(2)仪器：变色龙免疫分析仪(ELASA比色用)及美国雅培I-2000全自动免疫发光分析仪。

　　1.3 方法 将标本复溶后，分别以GICA试纸条、ELISA试剂盒和微粒子化学发光检测技术平行检测HBsAg，其中GICA在15分钟和30分钟各观测一次结果，以后者为报告结果(测定结果应在15分钟内读取，30分钟后判定无效);ELASA测定严格按试剂盒操作说明书操作，分别设空白和阴、阳对照孔，反应终止后于450/630nm双波长测定OD值，结果判断：样品OD值/阴性对照平均OD值≥2.1判断为阳性，否则为阴性，阴性对照OD值低于0.05作0.05计算;发光定量操作前按要求做好试剂定标工作，并作室内质量控制，依据试剂说明结果大于0.05ng/ml判定为阳性。

　　结 果

　　1、 所有标本的MEIA定量结果有87.5%位于(0-10)ng/ml区间，12.5%位于(10-20)ng/ml，阳性率为66.7%，均值为4.09ng/ml。三种检测方法的判定结果比较如表1

　　表(1)：三种方法测定血清HbsAg低值弱阳性样本的结果比较：

　　酶 免

　　金 标

　　+ —

　　+ —

　　发光法

　　+

　　72

　　6

　　60

　　18

　　—

　　0

　　39

　　9

　　30

　　合 计

　　72

　　45

　　69

　　48

　　2、 以MEIA为标准做统计，两种方法测定血清HBsAg的各诊断指标统计如表2

　　表(2)：GICA和ELISA测定血清HbsAg低值弱阳性样本的各诊断指标：

　　GICA(%)

　　E L A S A(%)

　　灵 敏 度

　　81.3

　　92.9

　　特 异 性

　　81.3

　　100.0

　　阳性预示值

　　89.7

　　100.0

　　阴性预示值

　　68.4

　　86.7

　　总 有 效 率

　　81.3

　　95.1

　　讨 论

　　在临床检验工作中HBsAg测定的方法学不同常常引起医疗纠纷及临床医师的误解,一般有以下几种情况:1、漏诊和误诊, GICA检测HBsAg弱阳性样本时造成假阴性或假阳性;2、GICA和ELASA检测结果为阴性而MEIA的检测结果为阳性。这些情况让临床医师常常感到困惑, 其实这正体现了MEIA在方法学上的优势及在临床诊断上的重要价值，解释了ELISA检测乙肝五项结果为少见模式的标本用MEIA复检后多数为常见模式，然而三种方法在临床应用上各有优缺点。

　　GICA检测HBsAg具有简便快速、可单份操作等优点，能满足急诊检验的需要，如为门、急诊病人和无偿献血现场采血前检测HBsAg提供了便利条件，但由于测定灵敏度低于ELASA法加上其成本是ELASA法的4-5倍使金标检测的应用受到一定的限制，为了确保检验结果的准确及临床用血的安全，经GICA初筛测定为HBsAg阴性或可疑弱阳性的的标本仍需用ELASA进行复检，尤其是可疑标本，必要时需要用MEIA复查;ELASA测HBsAg无疑是目前应用最为广泛的方法，因为其在各诊断指标都比较理想且成本较低，只需要一台酶标仪，基本满足了临床需求，但随着医学的发展与进步以及患者要求的日益严格，显然存在差距;微粒子化学发光检测技术(MEIA)检测HBsAg是目前世界上检测乙肝标志物的金标准，它不但灵敏度高且抗干扰能力强，重复性好，并可单份检测，检测时间只需28分钟，但由于仪器昂贵、试剂成本较高在我国应用单位很少，只适用于大型医院开展针对弱阳性或可疑弱阳性标本的检测。由于免疫学技术的不断发展，快速简便低成本的化学发光、电化学发光、荧光免疫技术等新一代检测方法的不断推出，以满足定量检测的要求。HBsAg检测的灵敏度、特异性明显提高，使HBsAg滴度表达很低的标本得以检出，对临床诊断及流行病学调查有着重要意义。

　　参考文献:

　　[1] 姜玉章,余亚新,殷先德　HBsAg 低值弱阳性的检测及其临床意义[J ] . 中华微生物和免疫学杂志,2001 ,21 (3) 310.

　　[2] 魏来,陶其敏 努力规范肝脏疾病的免疫学诊断 中华检验医学杂志，2003，26：69-71

　　[3] 陈向阳.胶体金免疫层析法与ELISA检测HBsAg的比较.上海医学检验杂志，2001，16：305.

　　[4] 王健，闵福援.乙肝病毒血清标志物的检测方法及其临床意义.中华检验医学杂志，2005，28(1)：113-115.

　　[5] 卢敏，陆志檬.乙型肝炎的研究进展.国外医学·流行病学传染病学分册，2005，32：58.

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　　9

　　30

　　合 计

　　72

　　45

　　69

　　48

　　2、 以MEIA为标准做统计，两种方法测定血清HBsAg的各诊断指标统计如表2

　　表(2)：GICA和ELISA测定血清HbsAg低值弱阳性样本的各诊断指标：

　　GICA(%)

　　E L A S A(%)

　　灵 敏 度

　　81.3

　　92.9

　　特 异 性

　　81.3

　　100.0

　　阳性预示值

　　89.7

　　100.0

　　阴性预示值

　　68.4

　　86.7

　　总 有 效 率

　　81.3

　　95.1

　　讨 论

　　在临床检验工作中HBsAg测定的方法学不同常常引起医疗纠纷及临床医师的误解,一般有以下几种情况:1、漏诊和误诊, GICA检测HBsAg弱阳性样本时造成假阴性或假阳性;2、GICA和ELASA检测结果为阴性而MEIA的检测结果为阳性。这些情况让临床医师常常感到困惑, 其实这正体现了MEIA在方法学上的优势及在临床诊断上的重要价值，解释了ELISA检测乙肝五项结果为少见模式的标本用MEIA复检后多数为常见模式，然而三种方法在临床应用上各有优缺点。

　　GICA检测HBsAg具有简便快速、可单份操作等优点，能满足急诊检验的需要，如为门、急诊病人和无偿献血现场采血前检测HBsAg提供了便利条件，但由于测定灵敏度低于ELASA法加上其成本是ELASA法的4-5倍使金标检测的应用受到一定的限制，为了确保检验结果的准确及临床用血的安全，经GICA初筛测定为HBsAg阴性或可疑弱阳性的的标本仍需用ELASA进行复检，尤其是可疑标本，必要时需要用MEIA复查;ELASA测HBsAg无疑是目前应用最为广泛的方法，因为其在各诊断指标都比较理想且成本较低，只需要一台酶标仪，基本满足了临床需求，但随着医学的发展与进步以及患者要求的日益严格，显然存在差距;微粒子化学发光检测技术(MEIA)检测HBsAg是目前世界上检测乙肝标志物的金标准，它不但灵敏度高且抗干扰能力强，重复性好，并可单份检测，检测时间只需28分钟，但由于仪器昂贵、试剂成本较高在我国应用单位很少，只适用于大型医院开展针对弱阳性或可疑弱阳性标本的检测。由于免疫学技术的不断发展，快速简便低成本的化学发光、电化学发光、荧光免疫技术等新一代检测方法的不断推出，以满足定量检测的要求。HBsAg检测的灵敏度、特异性明显提高，使HBsAg滴度表达很低的标本得以检出，对临床诊断及流行病学调查有着重要意义。

（实习编辑：陈战锋）