如何选择临床检验试剂？

　　摘要:许多临床检验项目需要通过试剂来完成的。在实际工作中，由于所用的仪器种类繁多，试剂盒品牌不一，实验室工作人员业务能力的差异等，造成不同实验室间的测定结果差异较大。不同厂家品牌的试剂，因其生产原料、生产流程、制造工艺、质量控制等差别，试剂的质量也相差甚远。对某一个检验项目而言，并不是所有的试剂都得出同样的结果。检验结果的质量如何保证?因此我们要通过一系列的验证试验来决定如何选择最合适的检验试剂，以达到实验室标准化管理的要求。

　　一、试剂

　　定义：引发或催化化学反应从而使分析物被检测或测定所必需的物质。

　　分类：一般试剂(generic reagent)、原厂(Original Equipment Manufacturer)试剂、替代(Replacement)试剂。

　　一般试剂：用于手工操作或任何开放系统，是实验室进行性能验证时可选择的试剂。

　　原厂试剂：用于特定的分析仪(封闭或半封闭系统)。由OEM 生产或由其他供应商提供。

　　替代试剂：由设备制造商以外的其他供应商提供的用于特定分析仪的一般试剂。

　　如何选择试剂

　　试剂的选择必须在分析许多因素的基础上而做出。首先，列出这一项目的所有可能得到的试剂;获取试剂相关信息;试剂的包装和成分;在选择前做验证试验。

　　(一)选择试剂时需考虑的因素

　　1.实验方法的复杂性

　　在选购试剂盒时要仔细阅读试剂盒说明书，对试剂盒所用方法的原理、试剂配方(包括缓冲液、底物、添加剂等)有所了解，选择卫生部临床检验中心推荐的常规方法的试剂盒。有些项目没有推荐常规方法，应该选择公认的测定方法试剂盒。对于手工操作的试剂盒，有些试剂盒试验步骤少，不需要较高的技术要求(如精确吸样)而更容易操作;有些方法有需要准确计时，容易因为操作人员技术掌握程度等原因而导致工作中断而影响准确计时，进而出现错误;有些方法需要更多的操作时间和工作人员的关注。选择试剂盒时应考虑上述因素。

　　2.厂商的支持

　　1)必须有严格的溯源性。不同厂家提供的试剂说明书的严谨性有很大的区别。如在某些试剂盒内，有图解操作说明书，以图形的形式描述每一操作步骤，可以快速指导操作人员操作。说明书应清楚、图解清晰、不含糊;应详述常见的操作问题和注意事项，以及故障排除方法，并提供免费技术支持电话。说明书还应包含反应原理和视觉上读数或判断的终点。颜色终点通常比凝集终点更易判断，且受人为因素影响小。

　　2)此外，试剂盒内的设计合理，使试剂按使用顺序有规律摆放、方便使用的包装、明确的标识，这些都更方便用户使用。

　　3)要有明确简明的操作规程，在试验台上放置简短的操作卡可以避免错误、使试验顺利。

　　4)供应商要有足够的库存周转以避免试剂的效期太短。最好在当地有试剂库，可以减少医院试剂的库存。

　　5)每个项目检测均需要作质控，但并不是所有厂商都将质控物包装在试剂包内，有些时候根本不提供质控。对于定量试验我们尽量选择带有高、低值质控物的试剂;对于定性试验最好选择带有临界值质控物以及阳性和阴性质控物的试剂，临界值质控物应与临床标本有相似的反应性，强阳性反应的质控物不能预示试验性能降低，而临界值质控物能监测试剂检测的灵敏度。

　　3.可靠性

　　评价试验方法或试剂的最根本因素是试验能准确提供临床有用信息——试验的敏感性和特异性。这一信息应由生产厂商提供。我们也应根据国际参考方法对试剂的敏感性和特异性作出对比和评价。

　　1)室间质量评价也被称作能力验证(proficiency testing，PT)的成绩是评价特定试验系统可靠性的一种途径。每一次PT结果将PT参加者按试验系统分类分析。从这一分析结果可评价参加者变异性(精密度)和每一系统的均值与靶值的接近程度(准确度，偏倚)。但是用PT成绩准确评价偏倚也有一定缺陷，因为一些人工的PT试验标本往往由于基质效应而不能与病人标本一样发生反应，造成偏倚假象，当分析病人标本时并不出现这种假象。只有当参加者PT结果准确性出现大差异时，在评估参加者检测系统时是有意义的。

　　2)试剂容易因试剂包装、运输时保存温度的改变、受潮和光照等原因而变质或效能减低。大包装的试剂比小包装试剂更易受环境影响。因而供应商应能根据实验室的规模大小提供不同规格包装的试剂，并能保证物流公司或厂家自身配送队伍能按试剂要求的温度运送，全程保持温度一致。

　　4.经济和成本

　　每项检测的实际成本取决于许多方面，通常与供应商提供的项目单价有很大差异。

　　1)首先应该根据自己实验室的工作量仔细考虑试剂包装，比较实验室的工作量和试剂包装是否会导致试剂的过期或浪费，试剂必须在有效期内使用完毕。如果需试验量大，就应该选择大包装试剂。如果样本量不大，几周甚至一个月才检测一次的项目，与其自己测定还不如送到其他实验室检测。不仅要考虑试剂盒的有效期，而且要考虑一旦试剂开封后其在机上有效期、复溶稳定期，甚至试剂盒中的试验条、玻片、电极、托架或托盘等都有可能变质。

　　2)储存空间也代表成本，尤其试剂盒很大、包装不经济、浪费很多空间或试剂需要冷藏或冷冻保存。实验室将配备更多更大容积的冰箱，因而对试剂的包装也要有所要求。

　　3)严格遵照厂商的质控、校准建议和技术说明书执行。从经济角度讲，做较少的质控和校准更节省试剂和劳动成本。所有实验每天都需要做质控。一般而言需要做阳性和阴性质控或两水平质控。某些试剂盒中提供质控，有些厂商不提供质控物。要确定这些自备的质控物和校准物是否构成额外的成本支出。一些在玻片或卡片上进行的免疫反应都包含阳性和阴性质控，不需要额外的质控。

　　4)如果由于某个额外的试验必须参加额外的PT计划，那么PT成本可能很大。

　　5)试验中最主要的成本是员工的时间：包括试剂的准备、校准、质控和系统维护。

　　(二)、试剂盒的性能评价

　　在考虑上述方法学、厂商支持、可靠性、经济成本等因素的基础上，对初步选定的试剂需进行性能评价，以确定该试剂是否符合要求。

　　1.试剂盒性能评价的重要性：同一种试剂有许多生产厂家，不同厂家产品的质量、技术含量等常有区别，有时即使同一厂家不同批号的同种试剂因原料来源、纯度不同以及生产条件变动，会产生批间变异。同一批号的同种试剂盒在储存、运输时的情况有所不同，性能也可能发生变化。因此对购入的试剂盒应进行性能检测，只有质量达到标准方可用于实际工作。

　　2.试剂盒性能检测的具体方法：总的原则应不低于《卫生部临床检验体外诊断试剂盒质量检定暂行标准》的规定。同项目试剂盒之间作比较，如果稳定性好、灵敏度高、线性范围宽、正向型试剂空白吸光度低、反向型试剂空白吸光度高、试剂空白速率低、瓶间差小者可视为优质试剂。具体评价方案见下表。

　　评价方案

　　参数参考标准

　　初步评价NCCLS EP-10A

　　方法学比较NCCLS EP-09A2

　　准确度NCCLS EP-05A

　　灵敏度分析灵敏度、功能灵敏度、检测低限、生物检测限

　　报告范围NCCLS EP-06A

　　特异性NCCLS EP-07A

　　参考范围NCCLS C28-A2

　　(三)、试剂选择原则

　　选择证件齐全的生产厂家，国外试剂应具有进口许可证、海关报关单等，国内试剂生产厂家应提供生产许可证，国家食品药品监督管理局或省、市、自治区食品药品监督管理局颁发的注册证、生产制造批文号以及检测报告等。

　　选择经室间质评和室内质控证实准确度高、重复性好、灵敏度高、线性范围宽、抗干扰能力强、稳定性高的试剂品牌。

　　在各项性能、质量指标相近的情况下，选择操作简便、易于保存、价格相对低廉的试剂盒，力求最佳的性能/价格比。

　　选择与本实验室仪器最匹配的试剂盒，获得一个较好的检验结果。许多仪器对试剂有特殊的要求，有些仪器依赖配套的专用试剂。

　　选购用于自配试剂的化学药品时，根据检验方法的要求及样品的含量而定，用于检测样本含量低、干扰因素多的物质所用的化学试剂，必须选用品级纯度较高的试剂，至少分析纯以上;而用于定性检测试剂要求相对较低，可选用实验试剂或化学纯。

　　试剂的选择是综合多种因素后所作出的决定。试剂性能评价的结果是选择质量高、性能好试剂的基础，也是试剂选择的前提。其次要考虑试验成本，试剂的总成本高于单项试剂成本，其中不仅包括消耗成本，还包括人员、设备成本以及当实验室需要做额外的性能评价时的成本。选择试剂时还必须考虑实验室人员的技术培训和经验水平。只有这样才能既保证了试剂质量又兼顾了成本效益，达到质量效益双赢。

　　附录：NCCLS(National Committee for Clinical Laboratory Standards)：临床实验室标准国家委员会

　　EP5-A：临床化学设备操作精密度评价 核准指南( Evaluation of Precision Performance of Clinical Chemistry Devices; Approved Guideline )用于 临床化学设备操作精密度评价的实验设计及如何与生产厂声明的精密度进行比较。

　　EP6-A：定量分析方法的线性评价：统计方法 核准指南 第二版( Evaluation of the Linearity of Quantitative Analytical Methods: A Statistical Approach; Proposed Guideline Second Edition )：指南可用于在法评价过程中检验方法线性、作为常规质量保证的一部分进行线性检查及验证厂家声明的线性范围。

　　EP07-A：临床化学实验干扰 批准指南( Interference Testing in Clinical Chemistry; Proposed Guideline )提供背景信息和鉴定程序，用于干扰物对检验结果影响的定性。

　　EP09-A2：用病人标本进行方法学比较和偏倚评估 核准指南( Method Comparison and Bias Estimation Using Patient Samples; Approved Guideline )主要用于检验两种临床方法或设备间的偏倚，和使用病人样本进行方法比较的实验设计及数据分析。

　　EP10-A：定量实验的初步评价方法 核准指南(Preliminary Evaluation of Quantitative Clinical Laboratory Methods: Approved Guideline)主要用于初步评价临床检测试剂的线性漂移、偏差、精密度、交叉污染等。

（实习编辑：陈战锋）