精子冷冻存活的早期认识

　　早期冷冻生物学研究遵循人类精子冷冻保存技术的发展方向，已对下述冷冻存活因素甚为重视并开展了一系列调查。

　　（1）温度休克：即冷冻温度之上的快速冷却的有害作用（人类精子对温度休克几乎没有敏感性，但有个体差异，蛋黄对某些敏感个体的精子能降低温度休克的作用）。

　　（2）低于冷冻温度的冷却速度：与同时发生的导致冰块形成及脱水的程度和大小有关。超快速（若干度 /秒，degrees/s）对大多数精子是致命的。另一方面，在体积较大的冰晶少量形成情况下，慢速（1～ 25℃ /min）冷冻，则可保持平均约 70% 冷冻存活率。

　　（3）冰晶形成的大小、形状、程度和位置：涉及细胞内冰的形成，其作用与超微结构的损伤及脱水效应等相仿。在成功的冷冻保存期间，细胞内冰晶不是一种精子致死的因素：甘油可减慢冷冻速度。在伴有慢速冷冻所致的细胞外冰形成的脱水期间，溶液效应可能是精子的致死原因。

　　（4）冷冻保护剂（如甘油）的作用：应确定具有平衡系统的最佳冷冻生存条件、冷冻保护剂浓度及其可能的毒性作用和保护程度。缓冲系统和（或）蛋黄扩展剂的使用可能有利于这种冷冻保护作用。

　　（5）冷冻保存剂的最终温度：作为一种有利于贮存的温度，对精子应是无害的。对人类精子不存在有害温度的低限，而且 - 75℃ 到 - 196℃ 的快速变化，相对于最终温度看来是无害的。

　　（6）在达到最终温度后的贮存时间：旨在确定冷冻保存期间防止细胞丢失的条件。液氮温度，-196℃ ，在实际的长期冷冻保存中看起来是最佳的。

　　（7）解冻速度：旨在确定从冷冻后非活性状态回到解冻后（或未冷冻）活性状态时细胞恢复最佳活力的速度。对此尚有些争论，但在冷冻存活的情况下通常快慢速度都可使用，其结果是相仿的。

　　（8）潜在的冷冻损伤：与未冷冻的对照细胞群相比较，解冻后细胞功能活性可能会加速丧失。其相仿结果提示人们应强调为了使精子在女方体内"等待时间"降至最少，重视在应用冷冻精子进行人工授精过程中正确安排人工授精时间的极端重要性。这种解冻后的"等待时间"会降低精子授精的有效性。

（实习编辑：黄秀杰）