“敌鼠”中毒的快速检验

　　“敌鼠”(diphacinone) 是一种常见的抗凝血杀鼠剂，属于茚二酮类杀鼠药，其化学名为2 - (2 ，2 二苯基) 乙酰基- 1 ，3 茚满二酮，常使用其钠盐，称为敌鼠钠盐。“敌鼠”为无嗅黄色针状结晶，其钠盐为黄色粉末。“敌鼠”或其钠盐均为高毒品，对小鼠经口LD50为112～196 mg/ kg ，钠盐LD50为6112～100. 7 mg/ kg ;成人口服0106～0. 25 g 敌鼠钠盐可引起中毒，015～2. 5 g 可致死。

　　该类药主要的毒理作用是拮抗体内维生素K1 的活性，阻碍凝血酶的合成，损害微血管，降低血液凝固能力，从而造成皮下出血和内脏大量出血而引起死亡。该类药以1/ 万的含量配成毒饵，用于卫生灭鼠工作。此类杀鼠剂的中毒潜伏期较长，发病缓慢，一般口服后3～4 d ，长者19 d ，平均10 d 才出现中毒症状，死亡高峰为4～6 d。因误服、使用不当或有意投毒造成人和牲蓄中毒死亡的事件时有发生 。笔者对血和尿中的敌鼠钠盐采用不同的提取净化方法，然后用化学分析法和薄层色谱法进行分析，结果报告如下。

　　1 　材料与方法

　　1.1 　材料与试剂　硅胶GF254薄层板(10 cm ×5 cm) ，青岛海洋化工厂生产；紫外灯(波长254 nm和366 nm) ；无水乙醇，乙酸乙酯，氯仿，甲醇，丙酮，四氯化碳，石油醚，苯，无水硫酸钠，中性氧化铝，均为分析纯。10 %盐酸，0101 mol/ L NaOH ，1 %三氯化铁乙醇溶液；敌鼠钠盐(含敌鼠钠80 %) 由中心消毒科提供，配成2 mg/ ml的丙酮溶液。

　　1.2 　样品的处理

　　1.2.1 　血样的处理　取510 ml 血，加10 %盐酸数滴调pH 值为3 ，用乙酸乙酯提取3 ×20 ml 次，合并提取液过自制的10 ml 正己烷淋洗过的净化小柱(三极中性三氧化铝： 无水硫酸钠=0. 2∶015) ，收集滤液于60 ℃水浴挥干，得检样(血) 。

　　1.2.2 　尿样的处理　取15 ml 尿，加10 %盐酸数滴调pH 值为3 ，用乙酸乙酯提取3 ×30 ml 次，合并提取液用0101 mol/ L NaOH调pH至9 ，弃有机相，再用乙酸乙酯提取水相3 ×20 ml ，合并乙酸乙酯提取液过正己烷淋洗过的净化小柱(三极中性三氧化铝∶无水硫酸钠= 0. 2∶0. 5) ， 收集滤液于60 ℃水浴挥干， 得检样(尿) 。

　　1.2.3 　对照品的处理　各取2 g 敌鼠钠盐，分别按血和尿的处理方法提取净化后，挥干得对照品(1) 和(2) 。并把直接用丙酮溶解的2 mg/ ml 敌鼠钠盐作为对照品(3) 。

　　1.3 　“敌鼠”的检验

　　1.3.1 　化学分析法—三氯化铁显示反应　分别取用1 ml丙酮溶解的检样(尿) 、检样(血) 、对照品(1) 和(2) 以及2 mg/ ml 的对

　　照品(3) 溶液1 滴滴于滤纸上，加1 %的三氯化铁醇溶液1 滴。

　　1.3.2 　薄层分析法　把上述检样和对照品分别点样于硅胶GF254薄层板上，在3 组不同的展开剂中展开。经展开凉干后， ①在254nm波长的紫外光照射下观结果；②在366 nm波长的紫外光照射下观察结果；③上述薄层板喷雾1 %三氯化铁乙醇溶液后再观察结果。展开剂： ①三氯甲烷∶乙酸乙酯∶乙酸= 4∶2∶1②四氯化碳∶甲醇= 2∶1③石油醚∶苯= 10∶1

　　2 　结果

　　三氯化铁显色反应　对照品及样品与三氯化铁的反应均呈砖红色。

　　3 　讨论

　　3.1 　提取净化条件的选择

　　3.1.1 　血样的净化　由于血样少，检材有限，所以在提取净化过程中中性Al2O3 和无水Na2SO4 的量一定要适度。用量大了，“敌鼠”的提取率低。可能无法检验；用量小了，净化效果不好，最终影响实验结果。实验表明：采用中性Al2O3∶无水Na2SO4 =0. 2∶015 ，正好使510 ml 血样得到很好净化。

　　3.1.2 　尿样的处理　尿样成分较复杂，实验比较了直接用自制小柱净化与用反提后再过小柱，发现用10 %盐酸调pH 3 提取后再用的0101 mol/ L NaOH调pH 9 反提，净化效果更好，杂质对检验结果的干扰小。

　　3.1.3 　展开剂的选择　通过对3 组不同展开剂的Rf 值及显色结果的比较，发现虽然一些文献常推荐石油醚∶苯(10∶1) 作为敌鼠钠盐薄层色谱检验的展开剂，但对于生物检材，这组展开剂分离效果并不好。在实验用的3 组展开剂中，四氯化碳∶甲醇(2∶1) 的展开效果最好。

　　3.2 　检测方法的比较　三氯化铁显色反应和薄层法的检测结果一致。三氯化铁显色反应分析速度快，简便易行，可以作为一种筛选方法使用，要作进一步确认可用薄层法。

　　3.3 　本实验的关键是检材的提取净化　如果净化不好，不能得到明显的显色结果。检材通过自制小柱净化后，得到斑点清晰、分离出好的图谱。

（实习编辑：王哲君）