慢性乙肝患者持续感染探明

　　课题以了解HBV核心基因启动子突变与肝损害程度或HBeAg状态的关系为研究目的。实验所用血清采自南宁市各大医院住院的59例慢性肝炎患者，其中男47例，女12例，年龄在16～57岁。HBeAg阳性28例、阴性31例。PCR试剂购自美国克隆技术实验室，DNA纯化试剂购自美国Promega公司，循环测序试剂盒购自美国USB公司。DNA提取按酚/氯访/异戊醇(25/24/1)常规法抽提；DNA扩增：做套式PCR，每轮扩增反应条件相同：热启动94℃ 5分钟，然后94℃ 30秒，55℃ 30秒，72℃ 1.5分钟。30个循环后继续循环：72℃ 10分钟，22℃ 5分钟；用直接测序法对DNA进行序列测定。

　　套式PCR结果显示，59例慢性乙型肝炎患者35例HBV DNA阳性，阳性率为59.3%。16例HBeAg阳性患者HBV DNA阳性，阳性率57.1%(16/28),19例HBeAg阴性患者HBV DNA阳性，阳性率61.3%(19/31)。BCP序列测定结果显示，无正常序列标本，最常见的突变类型是nt1762、1764发生双突(A→T、G→A)，占57.1%(20/35）；其次的突变类型有nt1799位点突变，由C→G，占54.4%(19/35)，为无义突变；nt1752位点突变，由A→G，使该密码由异亮氨酸变为缬氨酸，占37.1%(13/35）；nt1753 T→C，占20.0%(7/35)。

　　核心抗原与e抗原有部份相同的序列，这部份序列可被宿主细胞毒性T淋巴细胞识别，核心多肽的改变可经免疫攻击导致慢性肝疾病。 研究结果显示每份标本在Enh2/CP区均有硷基突变，最常见的突变是 nt1762、1764发生双突(A→T、G→A) ，次常见的突变有nt1799位点突变，由C→G，为无义突变；nt1752位点突变，由A→G，使该密码由异亮氨酸变为缬氨酸，nt1753 T→C。核心基因启动子突变使乙型肝炎病毒（HBV）能够在体内持续感染，这些突变与慢性活动性肝炎有关。