探讨ELISA检测HBsAg中延时不同时间比色对结果的影响

　　ELISA以其特异性好、灵敏度高、操作简便等优点,广泛应用于各个临床实验室。根据ELISA测定乙肝HBsAg的

　　原理,其基本操作过程是:样本 加酶标记物 洗板 加底物液 加终止液酶标仪比色 判定结果。针对加终止液酶标仪比色 判定结果这一步操作,为探讨终止反应后延时不同时间比色的样本OD值变化对结果的影响,作者对13名HBsAg阳性的血清标本进行测定。现将结果报告如下。

　　1材料和方法　　1.1标本来源从428名来我院进行体检的体检者中检出的13例HBsAg阳性血清标本。

　　1.2仪器与试剂　　1.2.1仪器KHB ST-360酶标仪,KHB ST-36W洗板机。

　　1.2.2试剂潍坊三维生物工程集团有限公司提供的乙型肝炎病毒表面抗原诊断试剂盒(酶联免疫法)。

　　1.3方法　　1)对13例血清标本进行随机编号,依次为1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13号,用ELISA法检测13例血清标本HBsAg,按照试剂盒中的说明书操作。

　　2)在加入终止液混匀后立即在酶标仪上比色,记为　　0 min的OD值。然后依次在加入终止液后的10 min、　　20 min、30 min、40 min在酶标仪上比色,分别记为10 min、20 min、30 min、40 min的OD值。

　　3)结果判断。本试验的C.O.为0.105,以0 min的OD值/C.O.≥1者判为HBsAg阳性,13例血清全部阳性。

　　4)将0 min的OD值分别与10 min、20 min、30 min、40 min的OD值配成对子,共4对。用配对t检验,分别比较　　0 min的OD值与10 min、20 min、30 min、40 min的OD值,结果(表1)。

　　2结果　　从表1中可以看出,终止反应后延时10 min、20 min的OD值与0 min的OD值比较,P>0.05,无统计学差异。终止反应后延时30 min、40 min的OD值与0 min的OD值比较,P<0.05,有统计学差异。

　　3讨论　　实验室在应用试剂盒检测标本时,一般都是按照试剂盒中的说明书进行操作。本试验试剂盒中的说明书上表明的比色时间应在终止反应的30 min内完成。

　　而作者所做的试验结果却是:在终止反应的20～30 min这段时间内,样本的OD值便与0 min的OD值有统计学差异。这种差异对OD值较高的强阳性标本影响不大,但对于OD值较低的弱阳性标本,容易造成假阴性结果。

　　从表1中可以看到,第9号标本在延时第10分钟比色时,已经由弱阳性转为阴性。对于有自动化免疫分析仪的实验室,不存在延时比色的问题。但对于没有自动化免疫分析仪的实验室来说,这个问题就应引起重视。

　　作者建议用ELISA进行HBsAg测定的操作过程中,加终止液终止反应后应立即比色。我国是乙型肝炎的高发地区,HBsAg携带者约为1.2亿,携带率为10%[1]。

　　为了避免给临床造成漏诊、误诊,我们在实际工作中,应以严谨负责的工作态度,认真实践,严格控制导致HBsAg假阴性结果的因素,减少误差,提高检测结果的准确性。

　　参考文献　　[1]王振英,张纪云,高玉芳,主编.放射免疫分析与临床[M].北京:中国科学技术出版社,1994:239.

 （实习编辑：张丽娟）