39健康

莪术内生真菌的分离与鉴定

  莪术(Curcuma ze&garia)是姜科姜黄属植物,其根茎及根产生的β-榄香烯是一种广谱、高选择性的抗癌药物。目前β-榄香烯提取自温郁金(c.wenyujin)根茎,工艺流程繁琐,成本高,有必要探索新的生产途径。近年来研究发现,内生真菌是植物微生态系统的重要组成部分,其中个别菌株能够产生与宿主相同或相似的活性代谢产物。本文首次对莪术根、根茎和块根内生真菌进行分离鉴定,为深入研究莪术内生真菌能否产生β-榄香烯类化合物提供实验材料。

  1材料与方法

  1.1材料:2~3年生莪术采自云南屏边县新现乡。

  1.2培养基:马铃薯葡萄糖培养基(PDA)、查氏培养基、促孢培养基(KH2P04lg,Mg-SO40.5g,KN031g,KCl0.5g,淀粉0.2g,葡萄糖0.2g,琼脂2g,水1000ml,pH自然)。

  1.3莪术内生真菌的分离:新鲜莪术的根、根茎和块根用自来水洗净,消毒纸巾吸干水分。按常规无菌操作,75%酒精漂洗3~5min,无菌水冲洗3~4次,无菌滤纸吸干水分,0.1%升汞漂洗20~30s,无菌水冲洗5次。用无菌解剖刀将表面消毒的根、根茎和块根的韧皮部切成约0.5×0.5cm2小片,置于PDA平块上,28℃温箱培养3~7d。待样品边缘有菌丝长出,挑取菌丝尖端接种于新的PDA平板,经数次纯化后转接到PDA斜面上备用。同时做对照实验,将表面消毒后的根、根茎和块根不作切割置相同条件下培养,结果无任何微生物长出,证明表面消毒彻底,分离到的真菌是莪术的内生真菌。

  

莪术内生真菌的分离与鉴定

  1.4内生真菌的鉴定:挑取纯化的真菌菌丝分别接种于PDA和查氏培养基上,采用三点接种法培养后肉眼观察菌落特征,并采用插片培养法进行显微观察。对其中不产孢的菌株再用促孢培养基培养。参照文献鉴定真菌。

  2 结果与讨论

  2.1莪术内生真菌种属:从莪术根、根茎和块根中分离到24株内生真菌。经鉴定,分属表1中的8个属。其中青霉属16株,分离频率66.67%,为优势种群,镰孢属2株,分离频率8.33%,头孢霉属、曲霉属、无孢菌群、丝核菌属、壳变孢属及毛霉属各1株,分离频率均为4.17%。

  2.2莪术内生真菌在植物器官中的分布:

  从表2可以看出,莪术地下部分的不同部位都分离到内生真菌,说明内生真菌普遍存在于莪术地下器官中。但内生真菌在植物器官中的分布差异较大,寄生于根和根茎中的内生真菌种类和数量相对较多,青霉属(Peni.cilliurn)是其中的优势种群。

  3 结论

  分离到24株内生真菌,从分类上看,分属于5个目,5个科,8个属(群):从内生真菌存在部位看,莪术地下器官中均有内生真菌,但内生真菌的数量和种类有明显差别。这些特点与生态系统中物种多样性是一致的。所分离到的内生真菌中,青霉属分离频率最高,是莪术内生真菌中的优势种群。

  由于长期生存于植物细胞内或细胞间隙这一特殊环境,在协同进化的过程中,内生真菌与宿主植物相互影响,建立了和谐的联合关系,植物可能调节内生真菌的生物学特性,使内生真菌产生十分丰富的次生代谢产物。本研究分离到的24株内生真菌将为研究莪术内生真菌能否产生β-榄香烯等天然活性产物提供基础和依据。

2008-03-22 15:07:00浏览58举报/反馈
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